ThermoFisher：质粒大规模生产工艺整体解决方案（32页）.pdf

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1、质粒大规模生产解决方案目 录12446810121414161921222426质粒简介 -质粒生产工艺整体解决方案 -产品介绍 -01 大肠杆菌发酵 -02 菌体裂解 -03 质粒纯化 -04 放行检测 -05 质粒储存 -明星产品应用案例 -Bacto CD Supreme FPM培养基 -增强型一次性发酵罐可以改善微生物培养过程中的冷却 和氧传质效果 -利用阴离子交换层析优化质粒DNA的大规模纯化工艺 -resDNASEQ E.coli残留DNA定量系统 -resDNASEQ质粒DNA-卡那霉素抗性基因定量试剂盒 -KingFisher Flex磁珠法样品制备系统 -订购信息 -质粒简介

2、质粒是宿主染色体(或拟核)以外的闭合环状双链DNA分子，它们天然存在于E.Coli等细菌中，并为宿主提供竞争优势，包括抗生素抗性以及在极端环境中生存的能力，已成为重组DNA技术的基本工具。在治疗水平上，pDNA常被用作病毒载体基因治疗、mRNA疫苗的关键起始材料。同时，pDNA也被用于DNA疫苗和基因治疗，以对抗各种感染性、后天性和遗传性疾病。无论是作为关键起始原料，还是作治疗性药物本身，质粒DNA的生产都至关重要。根据质粒使用的类型(在药物开发中是否用作起始/关键原料、中间体、原料药或药物产品)，有不同的机构推动不同的指南进行指导，以规范质粒的生产，克服相应的挑战。鉴于临床开发后续阶段的监管

3、日益严格，重要的是通过原材料的控制、工艺的开发、产品的质量和检测角度评估不同需求，以满足质粒的高质量生产需求。11大肠杆菌发酵培养2菌体裂解Gibco Bacto CDSupreme FermentationProduction MediumGibco Difco SoytoneGibco Bacto Yeast ExtractThermo Scientific HyPerforma玻璃反应器Thermo Scientific HyPerforma一次性发酵罐S.U.F./增强型一次性发酵罐eS.U.F.Thermo Scientific HyPerforma一次性搅拌罐S.U.M.Gibco

4、细胞培养注射用水(WFI)Gibco NaOH溶液2质粒生产工艺整体解决方案1大肠杆菌发酵培养2菌体裂解3质粒纯化5质粒储存4放行检测resDNASEQTM E.coli残留DNA定量系统resDNASEQTM质粒DNA-卡那霉素抗性基因定量试剂盒PrepSEQ残留DNA样品制备试剂盒Pharma KingFisher Flex 96自动核酸提取仪(磁珠法)Thermo Scientifc Nalgene Biotainer生物储存瓶Thermo Scientifc BioProcess Containers一次性生物工艺容器Thermo Scientific DynaChrom一次性层析系统

5、POROS 50D弱阴离子交换填料POROS HIC疏水层析填料POROS 50HQ强阴离子交换填料3大肠杆菌的发酵具有密度高、需氧大、产热多的特点，提高大肠杆菌的生长密度可扩大质粒的产量。对于关键参数如溶氧的优化及精准调控，可以提高质粒产量1到50倍。此外，对于一些大肠杆菌发酵培养基、补料的选择，也会极大程度上影响到质粒的产量与质量。且随着对质粒生产的监管力度越来越大，动物源性材料的使用要求被减少，一次性产品的使用也越来越在新型领域被广泛接受。诱导性扩增(氨基酸剥夺和限制、温度诱导)提高大肠杆菌发酵密度(培养基、补料、培养方式、溶 氧、发酵罐的选择和优化)新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研

6、究技术指导 原则(试行)原液和制剂生产过程中原则上应避免人或动物来源的成分。如果使用人源或动物源物质，应符合中华人民共和国药典相关规定和/或参照ICH Q5A等技术指南提供外源因子风险评估。药品共线生产质量管理指南基因治疗和细胞治疗产品由于涉及的活体材料的可变性及可能含有传染性疾病的病原体，如质粒、病毒、病原体类产品的危害性较高，建议专用生产线或使用一次性生产系统进行生产。欧洲药典(EP8.0,2014)第5.2.8章医用产品的生产应优先考虑使用“非TSE相关动物物种材料”或“无动物源材料”，使安全风险最低化。美国药典为减少TSE传播的潜在风险，建议使用无动物源生产原料代替动物源原料。大肠杆菌